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首先將濾膜貼在遠藤培養基(m-ENDO agar)上，36℃培養24小時，發現可疑菌落后，用接種針挑取可疑菌落，在CHROMagar ECC培養基上進行四區劃線，35℃條件下培養18 ~ 48 h，出現藍色菌落即為大腸桿菌，紅色為其他大腸菌群。
另一確認試驗隨機挑選10 個以上具金屬光澤之菌落，若具金屬光澤之菌落小于10 個時則需全選，每個菌落取一接種環菌量接種于一管LST，于35 ± 1℃下培養48 小時，若有產氣者，由試管中取一接種環量培養液，接種于BGLB，于35 ± 1℃培養48 小時，觀察是否產生氣體；未產生氣體者即為大腸桿菌群陰性；產生氣體者，判定為大腸桿菌群陽性。（GB/T 8535-2008）
